一、為什么所有試劑和檢測(cè)樣本要平衡至室溫再進(jìn)行加樣操作？
溫度是ELISA試劑盒結(jié)合反應(yīng)的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測(cè)樣本。避免因溫度的動(dòng)力學(xué)反應(yīng)差異而導(dǎo)致ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。
二、為什么實(shí)驗(yàn)過(guò)程中孵育、洗滌需要振蕩？如何振蕩？
振蕩孵育使反應(yīng)更充分，振蕩洗滌使背景更干凈。建議使用酶標(biāo)專(zhuān)用12孔微孔板振蕩器。
孵育過(guò)程振蕩，可以加快、加強(qiáng)抗原抗體分子間的相互碰撞接觸，使得反應(yīng)過(guò)程更加，OD值通常會(huì)比未振蕩孵育的結(jié)果要高；洗滌過(guò)程振蕩，可以使洗板更干凈，在很大程度這能降低背景值，同時(shí)可以提高試劑盒檢測(cè)的靈敏度。
三、何時(shí)終止ELISA試劑盒反應(yīng)？
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)終需要酶催化底物顯色反應(yīng)來(lái)完成，在佳時(shí)間終止反應(yīng)是ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反應(yīng)系統(tǒng)中，S9出現(xiàn)淡藍(lán)色，S1–S3有明顯的階梯型藍(lán)色，便需要終止反應(yīng)；或者根據(jù)高濃度標(biāo)準(zhǔn)品孔在1220nm的OD值來(lái)決定，OD1220=0.-0.9之間時(shí)即可終止。
四、如何獲得良好線(xiàn)性的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)？
按照推薦方式保存標(biāo)準(zhǔn)品；溶解標(biāo)準(zhǔn)品之前需短暫離心，收集粉末；確保標(biāo)準(zhǔn)品溶解和混勻(大約10min)，然再進(jìn)行續(xù)的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且精確移液；顯色的恰當(dāng)終止；選擇合適的數(shù)學(xué)擬合方程繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
五、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)為什么必須設(shè)置復(fù)孔？
為獲得更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，強(qiáng)烈建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本進(jìn)行復(fù)孔檢測(cè)。因?yàn)閺?fù)孔檢測(cè)可以：
計(jì)算平均值，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確；
解決實(shí)驗(yàn)中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；
計(jì)算CV值，對(duì)實(shí)驗(yàn)的操作和試劑盒的精密度進(jìn)行評(píng)估。
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